摘要：
目的 探究一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型大鼠再灌注后24 h脑内一氧化氮(nitric oxide, NO)和自噬相关蛋白Beclinl、LC3B表达的影响,探讨L-NAME保护脑缺血再灌注损伤的机制.方法 18只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术(Sham)组、MCAO组,和MCAO + L-NAME组,每组6只.使用改良线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血90min再灌注模型.术中监测大鼠肛温,使其维持在正常范围.于再灌注后24 h处死大鼠,迅速取脑,用免疫荧光染色检测小鼠脑组织冰冻切片缺血半暗带区Beclinl和LC3B的表达水平,用免疫荧光双标分别将Beclinl和LC3B与NO介导的蛋白质损伤标志物3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)进行共定位.结果 Sham组大鼠没有3-NT染色阳性细胞,偶见Beclinl和LC3B染色阳性细胞,MCAO组小鼠脑组织缺血半暗带区3-NT、BeClinl、LC3B均大量表达(P＜0.05).与MCAO组相比,给予L-NAME治疗后,缺血再灌注大鼠脑组织半暗带区3-NT、Beclinl、LC3B表达均明显减少(P＜0.05).缺血再灌注小鼠脑组织半暗带区,Beclinl和LC3B分别与3-NT免疫荧光染色共定位.结论 L-NAME通过抑制NOS活性,减少NO的产生,直接避免神经元的氧化应激损伤;同时,氧化应激损伤的减弱也避免了自噬的进一步激活,起到了间接的神经保护作用.
