摘要：
目的 观察荧光染料(CM-DiI)标记人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSC)后,是否会脱落造成周围细胞被污染,标记细胞经静脉移植人脑梗死大鼠后是否会造成宿主脑内神经元被误染色;以及是否可以鉴定人BM-MSC产生脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF).方法 应用不同浓度CM-DiI分别标记培养的人BM-MSC,观察标记效率.将转染绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的人胚肾293T细胞和CM-DiI标记的人BM-MSC细胞共培养,7d之后观察CM-DiI的红色荧光和293T细胞是否双标记.将CM-DiI标记的人BM-MSC经静脉移植入脑梗死大鼠体内,观察植入细胞的红色荧光是否会沾染宿主细胞以及和BDNF免疫荧光的双标记.结果 不同浓度CM-DiI(1 000、200、100、20 nmol/L)均可成功标记人BM-MSC,其中1 000、200 nmol/L浓度标记24 h后观察标记效率均达到98％以上,比100、20 nmoL/L标记的效率明显升高(P＜0.01).CM-DiI标记后的人BM-MSC与GFP标记的293T细胞共培养,7d之内没有发现红色荧光沾染绿色的293T细胞.移植后第3天,静脉植入脑梗死大鼠的标记细胞的红色荧光没有沾染宿主脑内神经元,而且可以和BDNF的绿色荧光形成双标记.结论 CM-DiI可以高效地标记人BM-MSC.采用200nmol/L浓度标记的人BM-MSC细胞在体外培养和移植入脑梗死大鼠后都未发现对周围细胞造成污染,植入细胞的CM-DiI荧光可以鉴定产生BDNF的人BM-MSC.
