摘要：
目的 对比人胚胎干细胞(Hesc)培养过程中不同的酶消化细胞的特点,探讨适合Hesc长期体外培养的消化传代方法.方法 将正常生长在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养层上的Hesc分别用0.05%胰酶-EDTA和Ⅳ型胶原酶消化,重新接种,了解两种酶消化后的细胞存活率、克隆形成数量、细胞产量、冻存.复苏后细胞的存活率以及长期传代后细胞核型情况.结果 用0.05%胰酶-EDTA消化传代后形成的克隆大小均一,每代第3 d可获得碱性磷酸酶(AP)阳性克隆数(21.2±3.5)个/10倍视野,每次传代时Hes细胞产量可达(4.56±1.29)×105/cm2,传代时细胞存活率高达95.60%,经冻存-复苏后也有81.20%细胞存活率.用Ⅳ型胶原酶消化组每代仅可获得低浓度胰酶消化组AP阳性克隆数的一半,克隆大小不均,细胞产量也比低浓度胰酶消化组少,传代时细胞存活率和复苏后细胞存活率和低浓度胰酶组相似.分别用两种酶处理传代十余代,核型均无异常.结论 两种酶消化均适用于Hesc培养,二者作用特点不完全相同,分别适用于不同的实验需要.
