目的:干细胞治疗是国际神经科学研究的热点和重点,脑卒中能刺激内源性神经干细胞增殖短时间内跃迁,其潜在的机制受多条信号通路调控。课题组前期研究表明,EphB4过表达能促进体外培养人胚胎神经干细胞的增殖以及向神经元的分化,抑制干细胞向胶质细胞分化,推测EphB4很可能是疾病后神经元再生修复的关键靶点之一。体内研究显示我们自行提取的中药单体化合物莫诺苷对脑卒中后神经血管再生修复具有明显的促进作用。本研究拟在体外水平进一步明确莫诺苷对胚胎神经干细胞增殖、分化的影响,尤其是EphB4是否是其调控干细胞增殖分化活动的关键机制。方法:体外培养并经免疫荧光染色鉴定后的神经干细胞(NSCs),加入莫诺苷1、10、100μmol·L-1孵育24 h。进行氧糖剥夺处理12 h,之后采用Ki67免疫荧光染色检测NSCs的增殖,14 d后Map2、GFAP免疫荧光染色检测NSCs的分化。进一步地,使用携带绿色荧光蛋白的短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体转染NSC,采用实时荧光定量qRT-PCR和免疫蛋白印迹检测干扰效果。转染后细胞加入莫诺苷100μmol·L-1孵育2 d后,采用Ki67免疫荧光染色检测NSCs的增殖,莫诺苷孵育9 d后Map2、GFAP免疫荧光染色检测NSCs的分化。结果:莫诺苷能显著增加氧糖剥夺刺激后Ki67+细胞数量,并能显著增加Map2+神经元数量,减少GFAP+神经胶质细胞数量。转染LV-shRNA-EphB4后给予莫诺苷(100μmol·L-1)作用2 d,Ki67+/GFP+细胞仍有所增加;莫诺苷(100μmol·L-1)作用9 d,Map2+神经元数量有所增加而GFAP+细胞数量减少。结论:莫诺苷能显著促进NSCs的增殖以及向神经元方向的分化,其机制可能部分通过并不局限于EphB4信号通路。