摘要：
目的 探讨小分子干扰RNA (siRNA)对人肝癌细胞株MHCC-97H Survivin基因表达及其增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成针对Survivin基因序列特异性siRNA,用脂质体包裹转染人肝癌细胞株MHCC-97H,实验分为3组:Survivin siRNA转染组(Si-survivin组),无关siRNA转染组(NC组)和无转染组(正常对照组).采用反转录-聚合酶链反应、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达;四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖情况;分别以终浓度为12.5、25.0、50.0 nmol/L的siRNA作用于细胞后24h,采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡.结果 转染后48 h,Si-survivin组、NC组、正常对照组Survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.16、0.85±0.28、0.93±0.40,组间比较差异有统计学意义(F=414,P＜0.01);Si-survivin组最低,与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义(t=-20.56、-28.37,P均＜0.001).siRNA转染48 h后,Si-survivin组、NC组、正常对照组Survivin蛋白相对表达量分别为0.602±0.005、0.835±0.007、0.993±0.003,组间比较差异有统计学意义(F =238,P＜0.01);Si-survivin组最低,与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义(t=-40.17、-66.03,P均＜0.001).转染后72 h和96 h,Si-survivin组细胞抑制率[(19.5±3.6)％、(12.0±0.9)％]显著高于NC组[(3.6±0.9)％、(-1.3±6.1)％],差异均有统计学意义(t=36.18、42.53,P均＜0.05).不同浓度siRNA作用于细胞后24h,12.5、25.0、50.0 nmol/L siRNA组、NC组和正常对照组细胞凋亡率[分别为(22.64±2.54)％、(35.37±3.28)％、(53.28±4.35)％、(8.77±i.25)％、(9.72±1.37)％]比较,组间差异有统计学意义(F=35.93,P＜0.01),不同浓度siRNA间细胞凋亡率两两比较,差异有统计学意义(t=-29.73、-38.57,P均＜0.001).结论 Survivin特异性siRNA能抑制人肝癌细胞株MHCC-97H Survivin基因表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.
