摘要：
目的 利用常规PCR、巢式PCR(Nest PCR,nPCR)和定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)方法,调查非肺孢子菌肺炎(Non-Pneumocystis pneumonia,non-PCP)患者支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)的检出情况.方法 入选non-PCP患者50例留取BALF,分别以线粒体大亚基rRNA(Mi-tochondrial large subunit rRNA,mtLSUrRNA)为靶基因进行常规PCR(Mt-PCR)和巢氏PCR(Mt-nPCR),以主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)为靶基因进行常规PCR(Msg-PCR),检测Mt-PCR,Mt-nPCR和Msg-PCR三种方法的Pj特异性核酸片段检出率,并对PCR检出为阳性的样本分别用以mtLSU rRNA和Msg为靶基因的qPCR来检测相应Pj核酸片段拷贝数.结果 50例BALF中,Mt-nPCR、Mt-PCR及Msg-PCR的检出率分别为56％(28/50)、36％(18/50)和26％(13/50),其中三种检测方法同时阳性5例(10％),任意两种方法阳性13例(26％),任意一种方法阳性18例(36％),三种方法均为阴性14例(28％).36例PCR检测结果阳性的标本分别进行mtLSU rRNA定量PCR(Mt-qPCR)和Msg定量PCR(Msg-qPCR)检测,其中Mt-qPCR检测结果为:1000拷贝/μL～9 999拷贝/μL有36例(100％);Msg-qPCR检测结果为:100拷贝/μL～999拷贝/μL有3例(8.3％),1 000拷贝/μL～9 999拷贝/μL有16例(44.4％),10 000拷贝/μL～99 999拷贝/μL有9例(25％),105拷贝/μL以上8例(22.2％).36例配对检测qPCR样本中,Msg-qPCR拷贝数大于Mt-qPCR拷贝数样本28例(77.8％).结论 在non-PCP患者BALF中,Pj核酸扩增方法的检出率为72％,Mt-qPCR拷贝数主要位于103拷贝/μL数量级,Msg-qPCR拷贝数主要分布于103至105拷贝/μL.用核酸扩增方法在BALF中检测出Pj时,临床意义解读需要谨慎.
