目的研究引起儿童中耳炎感染的病原菌分布和耐药性特征。方法收集门诊就诊的164例中耳炎患儿的耳分泌物标本，分离鉴定病原菌，并进行药敏试验。按照2012年临床实验室标准化委员会（CLSI）推荐的抗菌药物敏感性试验标准，并使用WHONET5.6软件分析药敏结果。结果164例中耳炎患儿中，121例的耳分泌物培养出病原菌，阳性率73.8%；其中复合菌感染者9例，占5.5%。共分离出病原菌130株，其中细菌占83.1%（108/130），真菌占16.9%（22/130）。细菌以肺炎链球菌最多，其次是金黄色葡萄球菌。真菌主要为念珠菌和曲霉菌。婴儿期和幼儿期患儿的肺炎链球菌检出率分别高于学龄前期和学龄期，差异有统计学意义（P<0.05）。对青霉素不敏感的肺炎链球菌76.0%，对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌14.3%。结论由于引起儿童中耳炎的病原菌不同，应对患儿耳分泌物进行细菌培养和药敏试验，并根据结果合理选用药物治疗。