目的：对人血浆万古霉素浓度高效液相色谱法(HPLC)测定的不确定度进行评定。方法：对HPLC法测定血浆中万古霉素浓度的全过程进行分析，对于分析过程中称量过程、溶液配制、萃取过程、仪器及标准曲线拟合等因素带来的不确定度进行逐一分析，用A类评定程序评定了分析过程中随机效应引起的不确定度，用B类评定程序评定了分析过程中其他因素引起的不确定度，根据合成不确定度的公式计算出合成不确定度并进行了扩展。结果：置信概率P为95%时，血浆中低(8.44μg/m L)、中(54.22μg/mL)、高(171.63μg/mL)浓度万古霉素的扩展不确定度分别是2.57μg/mL，7.66μg/mL，24.03μg/mL。结论：线性拟合过程是本实验中低浓度时不确定度的主要来源，而中、高浓度时标准曲线配制是不确定度的主要来源。本方法可用于HPLC法测定血浆中万古霉素浓度的不确定度评定，为药物分析过程中的不确定度评定提供了参考。