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文章类型：
机构：
[1]首都医科大学附属北京天坛医院北京市神经外科研究所100050
研究所
北京市神经外科研究所
首都医科大学
首都医科大学附属北京天坛医院
首都医科大学附属天坛医院
出处：
ISSN：
关键词：
慢病毒载体
VP22穿梭蛋白
转染效率
神经干细胞
摘要：
目的 研究VP22穿梭蛋白对神经干细胞(neural stem cell,NSC)转染效率的影响.方法 通过酶切质粒pUL49ep获得VP22片段后克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)的慢病毒(Lentivirus)pHIV-EGFP质粒载体上,并采用PCR及基因测序技术对VP22基因进行鉴定.病毒包装采用三质粒系统共转染293T细胞后感染经体外原代培养、扩增的SD大鼠胎脑NSC,荧光显微镜下观察EGFP在NSC中的表达,流式细胞仪检测EGFP的表达,PCR检测基因组中VP22-EGFP基因的表达,MTT法测定转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的增殖活性.结果 PCR和DNA测序证实,外源基因VP22成功插入到质粒载体pHIV-EGFP的骨架结构中的启动子CMV和EGFP序列之间;荧光显微镜下均见有绿色荧光蛋白的表达;流式细胞仪测定结果:Lentivirus-EGFP及Lentivirus-VP22-EGFP转染的NSC的EGFP的表达率分别为(23.1±1.8)%及(34.9±2.9)%(P<0.01);PCR结果显示VP22整合入NSC的基因组DNA中;MTT结果显示转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的细胞生长曲线无明显改变.结论 VP22能够提高慢病毒对NSC的转染效率,且不影响其生长特性.表明VP22作为一种短链蛋白可以与编码的治疗基因形成融合蛋白增强基因治疗的疗效,在基因修饰的工程化干细胞中具有良好应用前景.
基金：
国家自然科学基金(30640073)%教育部归国留学基金%北京市自然科学基金(5063040)
第一作者：
第一作者机构：
[1]首都医科大学附属北京天坛医院北京市神经外科研究所100050
推荐引用方式(GB/T 7714)：
金贵善,刘福生,柴奇,等.慢病毒载体VP22-EGFP的构建及其对大鼠神经干细胞转染及表达的研究[J].中华神经外科杂志.2009,25(3):278-282.
