背景:神经干细胞的临床应用前景广阔,寻找多种方法体外促进神经干细胞的增殖和分化为今后的发展方向. 目的:介绍一种省时且经济的神经干细胞的培养方法.设计:观察对比实验.单位:北京市神经外科研究所.材料:选择4只孕14天Wistar大鼠,常温常湿环境饲养,体质量(180±20)g,均购自中国医学科学院动物所(实验动物许可证号码:SCXK1100-0006).DMEM/F12(1:1)以及B27购自Gibco公司;碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子购自PeproTech公司;巢蛋白单克隆抗体、胶质纤维酸性蛋白多克隆抗体、半乳酸脑苷多克隆抗体和微管相关蛋白2单克隆抗体购自Chemicon公司.胎牛血清购自Hyclone公司.方法:实验于2004-05/2004-10在北京市神经外科研究所损伤修复室完成.将Wistar大鼠脱臼处死,每次取4只胎鼠,将其脑组织置于Hank's液中,解剖显微镜下剥离软脑膜及血管,眼科剪剪碎脑组织并收集细胞于2个离心管中离心,弃上清液.①根据给予血清预培养与否将细胞分成血清预培养组及对照组.血清预培养组细胞加入含100 g/L胎牛血清DMEM培养液,培养48 h后换含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM/F12培养液;对照组细胞中直接加含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM/F12培养液,37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱培养1周.通过相差显微镜观察血清预培养组对照组培养48 h后神经干细胞的生长情况.②用100 g/L胎牛血清诱导分化后的第5天和第10天行nestin、胶质纤维酸性蛋白多克隆抗体、半乳酸脑苷多克隆抗体和微管相关蛋白2单克隆抗体免疫荧光染色,采用荧光显微镜观察检测两组神经干细胞的表达;对照组采用PBS缓冲液替代一抗,其它步骤同血清预培养组.主要观察指标:①相差显微镜下观察血清预培养组及对照组神经干细胞培养48 h后的生长状况.②免疫荧光染色检测两组神经干细胞的表达.结果:①血清预培养组细胞经培养48 h后,出现大量较规则的神经干细胞球,多数细胞球由8-10个细胞聚集而成.改用表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM/F12培养液后,细胞球增殖很快;对照组细胞培养48 h后只有不规则片状块,4-5 d后才出现规则的小细胞球.②荧光显微镜观察可见两组细胞的分化速度和分化方向相同,在诱导分化后的第5天,nestin、胶质纤维酸性蛋白、半乳酸脑苷为阳性,微管相关蛋白2为阴性;在诱导分化后的第10天,nestin和胶质纤维酸性蛋白为阳性,半乳酸脑苷和微管相关蛋白为阴性.结论:血清预培养可使神经干细胞聚球速度加快,促进神经干细胞增殖.