摘要：
目的开发成年猪胰岛分离方法.方法取成年猪胰体尾部,胰管内注入0.1%冷胶原酶(type Ⅺ)消化液,在38.5 ℃水箱中消化后,放入4 ℃ Hanks液中分离并用600 μm 的滤过网过滤.残留的组织重新悬浮在冷Hanks液中,并放入Ricordi's chamber内振荡5 min后再次过滤.胰岛分离分为对照组(n=14)、Pefabloc(胰蛋白酶抑制剂)组(n=8)及FOY(胰蛋白酶抑制剂)组(n=5).Pefabloc组和FOY组消化液中分别添加1.0 mmol/L Pefabloc或FOY.结果 Pefabloc组及FOY组的胰岛收获量分别为(11 848±3 530) 个/g和(14 496±3 693) 个/g,明显高于对照组的(8 505±3 349) 个/g,P＜0.05.消化后的消化液胰蛋白酶活性对照组为(114.7±50.0)BAEEU,明显高于胰管内注入前的(4.0±1.8) BAEEU及Pefabloc组的(5.5±2.7) BAEEU(P＜0.01),但Pefabloc组与胰管内注入前却差异无统计学意义.对照组胰岛收获量≥8 000个/g组的胰蛋白酶活性明显低于收获量＜8 000 个/g组的活性[(78.3±26.7) BAEEU vs (137.5±48.4) BAEEU],P＜0.05.对照组、Pefabloc组及FOY组纯化后的胰岛对不同浓度葡萄糖显示了良好的胰岛素分泌能力.结论本实验采用的胰岛分离方法能够获得大量的猪胰岛细胞,而且预防性添加胰蛋白酶抑制剂后进一步稳定地提高了胰岛收获量.
