摘要：
通过离子对反相高效液相色谱(IP-RPLC)同时检测细胞内的核糖核苷三磷酸及脱氧核糖核苷三磷酸现已成为可能,采用这种方法检测了16种正常及肿瘤细胞内的ADP、CTP、dCTP、GTP、UTP、dGTP、dTTP、ATP、dATP等核苷酸的含量,并进行了简要的对比及方法学验证.采用6%三氯乙酸分离提取样品,并用5 mol/l碳酸钾中和后进行HPLC分析.采用Waters 600E-486色谱系统,Symmetry C18(3.5 μm,4.6×150 mm)分析柱及Nova-Pak C18 Sentry Guard Column 进行色谱分析,柱温27 ℃.流动相由两种缓冲液组成,采用梯度洗脱,流速1.0 ml/min.缓冲液A包含10 mmol/l氢氧化四丁基胺,10 mmol/l KH2PO4及0.25%甲醇,并用HCl调pH至6.9;缓冲液B包括5.6 mmol/l氢氧化四丁基胺,50 mmol/lKH2PO4及30%甲醇,并用NaOH调pH至7.0.流动相开始时为60%A及40%B,30 min达40% A 及60%B,此比例一直持续到60 min.采用各标准品的水溶液作标准曲线(r均大于0.99).各物质测定的精密度(CV%)平均为日内0.9%,日间5.0%.各物质的检测限(pmol)分别为1.39(ADP)、4.32(CTP)、15.5(dCTP)、2.38(GTP)、4.42(UTP)、9.45(dGTP)、14.6(dTTP)、2.44(ATP)、11.8(dATP).该测定方法的平均回收率亦可达到99.5%(九种物质).这种分析方法不仅可以用来检测细胞或组织样品中的核苷酸水平,同时也可以用来监测由于药物或疾病引起的细胞内核糖核苷三磷酸及脱氧核糖核苷三磷酸库的含量变化.
