摘要：
目的:采用杂交瘤细胞融合技术构建特异性针对β1肾上腺素受体(β1-AR)细胞外第二环的单克隆抗体(β1-AAmAb).方法:设计合成两条肽段,偶联后作为免疫原混合免疫小鼠,挑选免疫反应强的小鼠进行细胞融合.筛选杂交瘤细胞、扩大培养,并于接种小鼠,14d后收集腹水,用Protein G对腹水进行纯化以获得单克隆抗体.结果:ELISA结果显示,杂交瘤细胞上清液中β1-AA的滴度明显高于对照组(2.9896 ±0.1873)vs.(0.0635 ±0.0386),差异有统计学意义(P ＜0.001).Western bolt分析发现,β1-AAmAb与商业化抗β1-AR多克隆抗体阳性对照具有相同分子量的条带.激光共聚焦结果表明,β1-AAmAb可与天然存在的β1-AR相结合.Annexin V/PI流式分析发现,β1-AAmAb可以诱导心肌细胞发生早期凋亡.乳鼠心肌细胞跳动频率实验证实,p1-AAmAb与心力衰竭患者血清中的β1-AA均可增加乳鼠心肌细胞跳动频率.结论:本研究成功构建了与心力衰竭患者血清中存在的β1-AA具有相同生物学效应的单克隆抗体,使用该单克隆抗体进行后续的研究可以使我们对β1-AA的致病机制有更好的认识.
