摘要：
心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖参与了心脏疾病的病理生理过程并发挥重要作用.本文旨在应用高内涵筛选(high-content screening,HCS)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析评价CFs增殖,以期建立精确定量评价细胞增殖和细胞周期的方法.采用酶消化法分离C57BL/6J新生乳小鼠(出生24～48 h)CFs,盘状结构域受体(discoidin domain receptor 2,DDR2)染色显示分离后培养的CFs纯度＞95％.CFs经血清饥饿12h后给予10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)处理24 h,进行溴脱氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)和二脒基苯基吲哚(diamidino-phenylindole,DAPI)原位染色或BrdU和7-氨基放线菌素D (7-Aminoactinomycin D,7-AAD)单细胞悬液染色,分别利用HCS或FCM检测CFs增殖和细胞周期.结果表明:(1) HCS分析显示,10％ FBS诱导组BrdU阳性细胞比例与无血清对照组比较有显著性差异[(12.96±0.67)％ vs (2.77±0.33)％;P＜0.05];细胞周期分析显示,细胞处于G0/G1期DNA为二倍体(2N),进入S期DNA复制,G2期DNA倍增(4N),到M期DNA平分到两个子细胞核中(2N).(2) FCM分析显示,10％ FBS诱导组BrdU阳性细胞比例比无血清对照组明显增大,差异显著[(11.10±0.42)％ vs (2.22±0.31)％; P＜ 0.05]; DNA含量直方图细胞周期分析显示,10％ FBS诱导组S期平台比对照组明显抬高.(3)对比分析HCS和FCM检测结果,BrdU阳性比例以及G0/G1、S、G2/M期细胞百分比等各项指标均无统计学差异.证实HCS和FCM两种技术能够应用于定量分析CFs增殖和细胞周期,方法实用可靠,结果一致.
