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本发明公开了一种免疫磁珠分选去除分化体系中胚胎干细胞的方法，属于医学生物技术领域。本发明包括如下步骤：（１）制备单细胞悬液；（２）ＭＡＣＳ分离纯化分化细胞：按１∶１００的稀释比例加入小鼠抗小鼠ＳＳＥＡ－１ ＩｇＭ抗体，使总体积为５００μｌ，４℃孵育１０ｍｉｎ；用２ｍｌ ＭＡＣＳ缓冲液洗涤细胞两次离心，去除多余的抗体；用８０μｌＭＡＣＳ缓冲液重悬细胞，加入包被羊抗小鼠ＩｇＭ抗体的免疫磁珠２０μｌ，４℃放置１５ｍｉｎ；加入ＭＡＣＳ缓冲液洗涤离心，弃上清，重新用５００μｌ缓冲液重悬细胞；２ｍｌ缓冲液预洗ＬＤ柱后，将５００μｌ细胞悬液过柱；１ｍｌ缓冲液洗柱两次，去除非标记阴性细胞；移柱出磁场，用缓冲液洗柱，收集洗液即为阳性细胞。本发明的优点是：操作简便快速，无须昂贵的实验设备，纯度较高，分筛后的细胞存活率高。
主权项：
免疫磁珠分选胚胎干细胞分化细胞中原始细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：（１）制备单细胞悬液：取培养的胚胎干细胞分化期细胞，用０．２５％Ｔｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ消化２－４ｍｉｎ，加血清终止消化，打散后离心，弃上清；用ＭＡＣＳ缓冲液重 悬细胞，过４０μｍ滤网获得单细胞悬液，调整细胞密度至１０↑［７］／ｍｌ；（２）ＭＡＣＳ分离纯化分化细胞：按１∶１００的稀释比例加入小鼠抗小鼠ＳＳＥＡ－１ＩｇＭ抗体，使总体积为５００μｌ，４℃孵育１０ｍｉｎ；用２ｍｌＭＡＣＳ缓 冲液洗涤细胞两次离心，去除多余的抗体；用８０μｌＭＡＣＳ缓冲液重悬细胞，加入包被羊抗小鼠ＩｇＭ抗体的免疫磁珠２０μｌ，４℃放置１５ｍｉｎ；加入ＭＡＣＳ缓冲液洗涤离心，弃上清，重新用５００μｌ缓冲液重悬细胞；２ｍｌ缓冲液预洗ＬＤ柱后，将５ ００μｌ细胞悬液过柱；１ｍｌＭＡＣＳ缓冲液洗柱两次，去除非标记阴性细胞；移柱出磁场，用缓冲液洗柱，收集洗液即为阳性细胞。
