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本发明提供了一种LRP4抗体细胞包被微孔板及制备方法和人LRP4抗体细胞免疫荧光检测试剂盒,属于疫检测技术领域,所述人LRP4抗体细胞免疫荧光检测试剂盒包括LRP4细胞包被微孔板,样品稀释液,阳性对照品、二抗和封闭液。本发明提供的LRP4抗体细胞包被微孔板上直接包被有LRP4‑GFP‑HEK293T重组细胞和EGFP‑HEK293T重组细胞;避免了短时期内重复进行质粒转染、细胞接种、细胞培养等过程次数,进而降低每次检测的成本,缩短检测时间。
主权项:
1.一种LRP4抗体细胞包被微孔板的制备方法,包括以下步骤:1)提供LRP4-GFP-HEK293T重组细胞和EGFP-HEK293T重组细胞:A)将携带GFP基因的重组LRP4全长DNA片段和表达EGFP基因的DNA片段分别重组到慢病毒载体pFUGW-H1中,获得pFUGW-LRP4-GFP重组病毒和pFUGW-EGFP重组病毒;所述重组LRP4全长DNA片段的具体序列如SeqIDNo.1所示;B)将获得pFUGW-LRP4-GFP重组病毒和pFUGW-EGFP重组病毒分别转染到HEK293细胞,分别获得LRP4-GFP-HEK293T重组细胞和EGFP-HEK293T重组细胞;采用流式细胞学筛选方法分别纯化LRP4-GFP-HEK293T重组细胞和EGFP-HEK293T重组细胞;2)分别将所述LRP4-GFP-HEK293T重组细胞和EGFP-HEK293T重组细胞以行为单位,交替放于每行微孔中用固定液固定、加入细胞冻存液后置于-80~-200℃保存;所述重组细胞的接种密度为0.8~1.2×105/孔;所述固定液为质量浓度3~5%的多聚甲醛;所述固定的时间为8~12min;所述细胞冻存液为DMSO液;所述DMSO液中胎牛血清FBS:DMSO为9:1。