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北京慧心医谷生物科技有限责任公司
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摘要：
本发明公开了一种诱导神经干细胞的方法及组合物，利用所述方法和组合物可将外周血单个核细胞诱导形成神经干细胞。所述神经干细胞能表达神经干细胞相关基因，能分化出神经元，星形胶质细胞及少突胶质细胞。上述神经干细胞体外诱导分化形成的多巴胺能神经前体细胞，移植入PD小鼠模型纹状体内无肿瘤形成，可改善小鼠帕金森病模型的行为学，并能延缓帕金森疾病的进程。本发明提供的神经干细胞诱导及分化方法操作简单快速，创伤性小，安全性良好，有望用于治疗帕金森病。
主权项：
1.一种诱导神经干细胞的方法，所述方法包含以下步骤：(1)从外周血中提取单个核细胞并在单个核细胞培养基中扩增单个核细胞；(2)利用携带基因OCT4,SOX2,c-MYC,KLF-4的仙台病毒载体转导扩增后的单个核细胞；(3)将转导的单个核细胞接种到用Matrigel包被的细胞培养板上在神经干细胞培养基中培养，继续培养直至出现神经干细胞克隆；(4)取出神经干细胞克隆，进行神经干细胞扩增，期间将神经干细胞在38.5-39.5℃条件下培养一周至一个月，获得仙台病毒被灭活的神经干细胞；所述单个核细胞培养基，其配方是基础培养基：49％Iscove’smodifiedDulbecco’smedium(IMDM)，48％Ham’sF-12，1％胰岛素-转铁蛋白-硒，1％chemicallydefinedlipidconcentrate，1％L-谷氨酰胺，0.05mg/ml左旋维生素C，5mg/ml牛血清蛋白BSA，0.018ul/ml硫代甘油；加入的细胞因子和化学小分子为：100ng/ml重组人干细胞因子，10ng/ml重组人白细胞介素3，2U/ml促红细胞生成素，40ng/ml胰岛素样生长因子IGF-1，1μM地塞米松，100μg/ml全铁转铁蛋白；所述神经干细胞培养基配方为：基础培养基为DMEM/F12和Neurobasal以1:1的比例混合,1×N2,1×B27,1％GlutaMAX，1％NEAA，加入的细胞因子和化学小分子为：10ng/ml重组人白血病抑制因子rhLIF、CHIR99021和SB431542。
