资源类型：
申请人：
首都医科大学宣武医院
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苏州宇测生物科技有限公司
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当前专利权人：
首都医科大学宣武医院
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苏州宇测生物科技有限公司
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申请号：
申请日期：
授权年份：
公开号：
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法律状态：
主分类号：
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摘要：
本发明涉及单分子检测方法在检测突触囊泡蛋白SV2A的浓度中的应用，并涉及检测突触囊泡蛋白SV2A浓度的基于计数的单分子检测方法及试剂盒。本发明首次将基于计数的单分子检测方法用于SV2A浓度的检测中，本发明的方法通过普通荧光显微镜即可实现，对设备的要求低，并且检测下限低（灵敏度高），检测动态范围宽，且CV值低。
主权项：
1.检测突触囊泡蛋白SV2A浓度的基于计数的单分子检测方法，其包括以下步骤： (1)将能够与突触囊泡蛋白SV2A结合的捕获抗体固定到磁珠上，加入含有突触囊泡蛋白SV2A的样品，使突触囊泡蛋白SV2A的第一位点与捕获抗体结合，从而捕获样品中的突触囊泡蛋白SV2A； (2)加入能够与突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合的检测抗体，使检测抗体与突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合，然后加入能够直接或间接与检测抗体结合的原位信号增强粒子；或者先将检测抗体与原位信号增强粒子结合而形成复合物，再将该复合物加入； 所述原位信号增强粒子的粒径为180nm～350nm，且含有荧光材料及载体， (3)用光学成像设备将所述原位信号增强粒子发出的荧光信号成像； (4)对原位信号增强粒子的个数进行统计，进一步计算得到样品中突触囊泡蛋白SV2A的浓度， 其中，步骤(1)和(2)可以分别替换为下述的步骤(1’)和(2’)，(1’)将检测抗体与样品混合，使其与样品中的突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合，然后加入能够直接或间接与检测抗体结合的原位信号增强粒子；或者先使原位信号增强粒子与检测抗体结合而形成复合材料，再将该复合材料加入样品中，使该复合材料与样品中的突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合；其中，所述原位信号增强粒子与所述步骤(1)中的原位信号增强粒子相同； (2’)将能够与突触囊泡蛋白SV2A结合的捕获抗体固定至磁珠上，然后加入至步骤(1’)的体系中，使所述捕获抗体与所述突触囊泡蛋白SV2A的第一位点结合，从而将突触囊泡蛋白SV2A捕获， 其中，步骤(1)和步骤(2’)中的突触囊泡蛋白SV2A的第一位点与捕获抗体的结合在pH8～10的范围内进行。
