目的 通过网络药理学探究三妙丸对强直性脊柱炎的作用机制，并使用分子对接技术进一步分析相关有效成份及核心靶点。方法 中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）检索三妙丸有效成份及作用靶点，使用人类基因数据库（GeneCards）、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、遗传药理学与药物基因组学数据库（PharmGKB）、疗效靶点数据库（TTD）、药物数据库（DrugBank）数据库检索疾病相关靶点，使用Perl语言进行归类数据分析，R语言绘制Venn图，分析出三妙丸作用于强直性脊柱炎的靶点。蛋白质相互作用数据库（STRING）网络平台检索靶蛋白之间相互关系，并导出PPI网络图，使用Cytoscape软件将药物有效成份及疾病相关靶点网络关系可视化。使用Bioconductor数据，R语言进行数据分析并绘制相关柱状图、气泡图、通路图。使用PubChem数据库、PDB数据库受体、配体信息，通过AutoDockTools进行分子对接、打分。结果 检索出三妙丸中共44个有效成份，其中25个有效成份与强直性脊柱炎相关联；三妙丸中有效成份作用靶点203个，强直性脊柱炎相关靶点2 200个，相关联靶点71个。基因本体富集分析（GO）及京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）分析，三妙丸通过白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、辅助性T细胞17细胞分化信号通路、破骨细胞分化信号通路、核因子-kappaβ信号通路治疗强直性脊柱炎。三妙丸有多种有效成份作用于强直性脊柱炎核心靶点环氧合酶2（COX2）、基质金属蛋白酶（MMP9），预测有效成份吴茱萸次碱、槲皮素、黄芩黄素可对COX2、MMP9靶点发挥作用。结论 三妙丸治疗强直性脊柱炎是多靶点、多途径和多重机制。吴茱萸次碱可能是作用于COX2、MMP9靶点治疗强直性脊柱炎的新机制。