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文章类型：
机构：
[1]首都医科大学宣武医院泌尿外科, 北京100053
泌尿外科
首都医科大学宣武医院
出处：
ISSN：
关键词：
神经源性膀胱
M3型乙酰胆碱受体
慢病毒载体
RNA干扰
摘要：
目的 构建膀胱平滑肌细胞(bladderSmoothmusclecllS,BSMCS)M3型受体干扰RNA慢病毒载体.方法 合成4条M3受体干扰序列,构建GV118-Sh-M3慢病毒载体,测序验证序列.将GV118-sh-M3慢病毒载体与质粒pHelperl.0、pHelper 2.0三个载体共转染293T细胞,收集病毒颗粒并用荧光法检测4组病毒滴度.体外原代培养BSMCs,4组GV118-sh-M3慢病毒(KD1、KD2、KD3和KD4)转染BSMCs,观察绿色荧光蛋白表达并通过RT-PCR、Western blotting法检测各组干扰效率.结果 成功构建4个GV118-sh-M3慢病毒载体,测序结果符合设计序列.4组GV118-sh-M3慢病毒滴度分别为2 × 108、6 × 108、5 × 108和5 × 108TU/mL.分别转染BSMCs后,KD1组绿色荧光蛋白表达量最高且干扰效率最高.结论 成功包装并筛选了 GV118-sh-M3慢病毒载体,为后续进一步研究干扰M3受体在神经源性膀胱中的作用奠定了基础.
基金：
北京市教育委员会科技发展计划面上项目(KM201410025016)
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第一作者：
第一作者机构：
[1]首都医科大学宣武医院泌尿外科, 北京100053
通讯作者：
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[1]首都医科大学宣武医院泌尿外科, 北京100053
推荐引用方式(GB/T 7714)：
尚振华,贾春松,颜灏,等.膀胱平滑肌细胞乙酰胆碱M3受体干扰RNA慢病毒载体的构建[J].首都医科大学学报.2018,39(3):398-403.
