摘要：
目的:利用全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,RA)诱导永生化的人神经前体细胞(immortalized human neural progenitor cells,hSN12W-TERT cells)分化,研究分化过程中细胞周期调节蛋白p27Kip1,p21Cip1,细胞周期蛋白激酶2(cyclin-dependent kinase2,cdk2)及细胞周期蛋白E(cyclinE)的变化,探讨永生化人神经前体细胞分化的相关分子机制.方法:取本课题组已经建立的永生化人神经前体细胞系hSN12W-TERT细胞(第12代)培养并给予1 μmol/L RA诱导.在RA诱导的第3,7 d观察细胞形态变化,用RT-PCR方法检测RA诱导前后hSN12W-TERT细胞p27脚Kip1,p21Cip1,cdk2及cyclinE mRNA的变化,用免疫细胞化学染色方法比较RA诱导前后p27Kip1蛋白表达的变化.结果:RA诱导第3 d,hSN12W-TERT细胞比未经RA诱导的正常hSN12W-TERT细胞生长缓慢且形态发生改变,表现为胞体变小,突起延长增多.至RA诱导第7 d时,hSN12W-TERT细胞形态变化更加明显,接近成熟神经元形态.RT-PCR结果表明,hSN12W-TERT细胞中p27Kip1 mRNA的表达在RA诱导后明显增加,而p21Cip1 mRNA的表达在RA诱导后略呈下降趋势.hSN12W-TERT细胞中cdk2、cyclinE的mRNA水平在RA诱导前后没有明显变化.免疫细胞化学染色结果显示,RA诱导第3 d,hSN12W-TERT细胞p27Kip1的表达比未经RA诱导的正常hSN12W-TERT细胞明显增加(P＜0.05),RA诱导第7 d,p27Kip1的表达进一步增加(P＜0.05).结论:p27Kip1参与RA诱导的永生化人神经前体细胞生长阻滞和分化过程,p27Kip1可能在永生化人神经前体细胞的神经元分化过程中发挥重要作用;且RA诱导后p27Kip1蛋白含量的增加是通过转录水平调节的.
