资源类型：
文章类型：
机构：
[1]首都医科大学宣武医院，北京老年医学研究所，北京 100053
首都医科大学宣武医院
[2]哈尔滨医科大学生物化学教研室，哈尔滨 150086
哈尔滨医科大学
[3]国家人类基因组北方研究中心，北京 100176
出处：
ISSN：
关键词：
MES23
5细胞系
酪氨酸羟化酶
克隆
摘要：
MES23.5细胞作为研究神经变性疾病的工具,是一种杂交瘤性多巴胺能神经元细胞系,由大鼠胚胎中脑细胞与小鼠神经母细胞瘤-胶质瘤细胞系N18TG2杂交而成.其酪氨酸羟化酶(tyrosinehvdroxylase,TH)的动物种属来源不清楚.应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从MES 23.5细胞系中克隆了编码TH的cDNA;结构分析表明,其cDNA编码区由1497碱基构成,共编码498个氨基酸,与大鼠和小鼠TH的同源程度分别为93%和100%.该杂交瘤细胞系表达小鼠TH.将该cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,经原核细胞表达、亲和层析得到了电泳纯的基因重组小鼠TH(recombinant mouse tyrosine hvdroxylase,rmTH).改良和建立了一种体外分析TH活性的新方法.活性分析证明,纯化的rmTH能催化L-酪氨酸发生加单氧反应生成L-3,4-二羟基苯丙氨酸(L-多巴).rmTH的表观分子量为56kD;其酶促加单氧反应的最适pH值为7.0.乙二胺四乙酸能显著抑制此酶的活性,而亚铁离子能明显增强其活性.
基金：
国家 973项目 (G2 0 0 0 0 5 70 0 5 )； 国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 2 714 3 7)； 北京卫生重点学科项目资助~~；
第一作者：
第一作者机构：
[1]首都医科大学宣武医院，北京老年医学研究所，北京 100053
[2]哈尔滨医科大学生物化学教研室，哈尔滨 150086
通讯作者：
通讯机构：
[1]首都医科大学宣武医院，北京老年医学研究所，北京 100053
[3]国家人类基因组北方研究中心，北京 100176
推荐引用方式(GB/T 7714)：
于泓,李尧华,冯秀丽,等.MES23.5细胞酪氨酸羟化酶的种属来源及其重组酶的活性测定[J].中国生物化学与分子生物学报.2004,20(1):95-100.
