摘要：
目的 通过对先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)患儿末端直肠的组织病理学研究,探索Shh/Bmp4信号通路基因甲基化修饰对ARM末端直肠神经系统(enteric nerv-ous system,ENS)的调控作用.方法 收集复旦大学附属儿科医院收治的20例ARM及8例非胃肠道疾病死亡患儿直肠末端组织标本.通过PCR、免疫组织化学和Western blot等方法检测末端直肠组织中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)含量及活性、Shh基因启动子区甲基化状态、Shh/Bmp4信号通路关键组分的表达及ENS发育情况.结果 ARM组患儿直肠组织中DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)的表达在mRNA和蛋白水平上分别为3.54±1.08、2.37±0.75和2.00±0.14,均较对照组的1.00±0.17、1.00±0.30和1.00±0.44明显升高,且差异有统计学意义(P=0.0141、0.0413、0.0120).ARM组Shh基因启动子区甲基化水平为3.31±0.53,明显高于对照组的5.47±2.20;蛋白表达水平为27655.03±9032.63,较对照组的73738.36±22061.03明显降低,组间比较,差异均有统计学意义(P=0.0435和0.0052).ARM组Shh/Bmp4信号通路关键组分Bmp4表达水平为1.00±0.16,较对照组3.84±0.71明显降低,组间比较,差异有统计学意义(P=0.0022).ARM组直肠组织中S-100标记的神经丛分布稀疏分散,其在黏膜下层和肌间神经丛的阳性神经丛染色密度分别为1.23±0.24和1.31±0.11,与对照组相同位置的值(4.21±0.36和4.36±0.65)比较,表达均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.0001).ARM组直肠中c-kit标记的cajal间质细胞和NSE标记的神经节细胞未见明显表达.结论 先天性ARM末端直肠组织整体处于高甲基化水平,且Shh基因启动子区处于高甲基化状态,Shh/Bmp4关键组分在ARM组织中表达下降,提示Shh高甲基化状态可能抑制Shh/Bmp4信号通路的表达.
