摘要：
目的 构建CD、Flt—1基因共表达重组质粒,并检测其对BT325细胞增殖抑制的影响.方法 从大肠杆菌及人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT—RCR)扩增CD基因和FLT-1基因片段,应用基因重组技术将CD基因和Flt—1基因片段克隆到真核表达载体pEGFP— C1中,经酶切鉴定及DNA序列分析证实所构建的载体.转染BT325细胞株,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用.结果 RT-RCR方法获得CD基因和Flt—1基因片段,酶切分析和DNA测序鉴定表明重组质粒pEGFP—C1— CD— Flt—1构建成功.转染72h后实验组细胞生长速度是control组的(33.2％±5.4％),流式细胞术发现实验组细胞的G1期细胞比例明显高于control组,细胞出现凋亡,实验组细胞的凋亡率为(19.7％±5.45％).结论 成功构建真核表达重组质粒pEGFP—C1—CD— Flt—1,其体外可抑制BT325增殖并诱导其凋亡.
