摘要：
目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术逆转神经胶质瘤细胞多药耐药性.方法根据多药耐药基因1(MDR1)的碱基序列设计并合成短发夹RNA(shRNA),构建逆转录病毒质粒载体,用阳离子脂质体法体外转染BT325细胞株,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达作为对照.采用定量PCR、Northern blot检测转染前后MDR1 mRNA的表达,Western blot检测蛋白表达;使用CCK-8试剂盒对转染后的细胞进行化疗药物敏感性试验,评价RNAi对多药耐药性的逆转作用.结果成功构建RNAi质粒载体.共转染实验组RT-PCR定量MDR1 mRNA相对表达水平均有所下降(P＜0.05);Northern blot表明,转染48 h细胞干扰最强;Western blot显示,siRNA各转染组P-糖蛋白(P-gp)的表达分别降低12.9%、30.3%和4.8%,在48 h抑制最强;而药物敏感试验显示,转染siRNA后细胞对药物的敏感性明显增强.结论RNAi能够明显抑制神经胶质瘤细胞系MDR1 mRNA和P-gp蛋白的表达,进而对多药耐药性发挥明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段.
