摘要：
目的克隆大鼠代谢型谷氨酸受体1亚型(mGluR1)基因特异片段,制备cRNA探针.方法从Wistar大鼠小脑中提取总RNA,以RT-PCR方法得到预期的599bp条带,将这一片段克隆到pGEM-Teasy载体上,经酶切鉴定正确后送测序.将重组质粒经限制性内切酶酶切制备成线性模板,通过体外转录的方法合成地高辛标记的mGluR1 cRNA正义及反义探针.取成年Wistar大鼠小脑组织进行原位杂交实验,以检测探针的可靠性.结果测序证实用RT-PCR的方法获得了mGluR1基因特异片段,成功地构建了 pGEM-T mGluR1重组质粒.根据斑点杂交实验结果计算出正义、反义探针浓度分别为10ng/μl及30ng/μl.原位杂交实验的结果显示,用mGluR1反义探针进行杂交的阳性信号主要分布在大鼠小脑蒲肯野氏细胞胞浆,用正义探针杂交无阳性信号.结论本实验克隆了mGluR1基因特异片段,并制备了 cRNA探针,用大鼠小脑进行的原位杂交实验显示,此探针灵敏度高,特异性好.
