目的：探讨可提高胰岛产量和功能活性的小鼠胰岛分离、纯化的方法。方法通过胆总管逆行灌注胶原酶溶液消化小鼠胰腺，经不连续密度梯度离心后，人工挑取、纯化胰岛。过夜培养后，用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验（GSIS），检测胰岛功能。电子显微镜（电镜）观察胰岛β细胞亚细胞结构变化。结果利用该改良方法平均每只小鼠可收集（200±20）个胰岛，胰岛直径大小为（175±22）μm。GSIS 结果发现胰岛素水平在低糖（2.8 mmol／L）和高糖（16.7 mmol／L）刺激下分别为（0.33±0.07）、（1.36±0.47）ng／（islet·60 min），高糖刺激的胰岛素水平是低糖刺激的4.12倍，差异有统计学意义（P ＜0.05）。电镜证实胰岛β细胞胞膜、线粒体膜完整，胞内可见大小不一的胰岛素分泌泡。结论胆总管逆行灌注胶原酶消化小鼠胰腺，体外不连续密度梯度离心联合人工挑取的方法是一种简便、快捷、稳定的小鼠胰岛分离方法，小鼠胰岛产量较高、形态完整，且 GSIS反应性良好。