摘要：
目的 通过增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转基因和CD45.1 两种工具小鼠,进行小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMM)过继性回输后体内示踪的研究.利用小鼠高血压模型,观察回输BMM对高血压心脏损伤的作用.方法 以EGFP转基因小鼠为供体,分离骨髓细胞,以巨噬细胞集落刺激因子诱导制备骨髓巨噬细胞.尾静脉回输EGFP+BMM到野生型小鼠.受体小鼠分2组:①实验组:每只注射2×106 EGFP+BMM;②对照组:注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS).术后1、7 d观察受体小鼠外周血中EGFP+细胞存活和比例;7 d后收取小鼠心、肾、脾和肝脏组织,观察GFP+细胞的表达.以CD45.1小鼠为供体,CD45.2小鼠为受体,同上进行BMM回输,术后7 d检测受体小鼠外周血中CD45.1+细胞的比例.利用血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)灌注建立小鼠高血压模型,同时回输PBS或EGFP+BMM.灌注后7 d,观察EGFP+BMM在心脏的浸润、心脏炎性反应和纤维化.结果 EGFP+BMM回输后1、7 d,外周血中EGFP+细胞比例分别为[1st day:(4.6±0.5)%;7th day:(4.4±0.5)%],对照组外周血中无EGFP+细胞存在.回输第7天,受体小鼠脾脏中有GFP+细胞表达,心、肾、肝中无GFP+细胞表达.CD45.1+BMM回输后第7天,外周血中CD45.1+细胞比例为(4.3%±0.4)%,对照组中无CD45.1+细胞.与对照组相比,AngⅡ灌注促进血压升高、心脏中炎性细胞浸润和胶原沉积.AngⅡ灌注后,回输的EGFP+BMM能浸润到心脏,促进心脏中炎性反应和纤维化,但不影响血压升高.结论 该方法解决了BMM的过继性回输后体内的标记示踪问题,回输BMM可以在受体体内存活,而且证实巨噬细胞回输促进高血压心脏纤维化的发生.
