摘要：
目的 探讨前列腺癌上皮细胞间质转化现象(EMT)是否在肿瘤干细胞(CSC)水平发生.方法 (1)将脂质体2000系统将缺氧诱导因子1α(HIF-1α)cDNA分别转染人前列腺癌细胞株LNCaP中的干细胞亚群LNCaP/SP和非干细胞亚群LNCaP/NSP,G418筛选稳定表达HIF-1α的抗性克隆.(2)采用Western印迹法鉴定HIF-1α及两种受其调控的下游基因的蛋白表达.同时检测细胞转染前后EMT指标蛋白的表达变化.(3)应用Transwell和四甲基偶氮唑盐(MTT)技术验证两种转染后细胞的体外侵袭和增殖能力的变化.(4)将两种转染后细胞裸鼠皮下致瘤,观察致瘤率、转移率及瘤体体积的差异.结果Western印迹法证实,与LNCaP/SP相比,LNCaP/HIF-1α/SP发生了典型的EMT:上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和细胞角蛋白18 (CK18)表达缺失,同时波形纤维蛋白(vimentin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、纤维连接蛋白(fibronectin)、组织蛋白酶D(cathepsin D)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)反常表达；另外,与LNCaP/NSP相比,LNCaP/HIF-1α/NSP发生了部分EMT转化(CK18表达缺失,同时vimentin和cathepsin D反常表达).与LNCaP/HIF-1 α/NSP相比,LNCaP/HIF-1α/SP的体外增殖和侵袭能力更强大.LNCaP/HIF-1α/SP不仅在裸鼠体内的皮下致瘤率(80％比53％,P＜0.05)和骨转移率(40％比0,P＜0.01)显著高于LNCaP/HIF-1α/NSP,而且瘤体体积也远大于LNCaP/HIF-1α/NSP的成瘤体积[(1008±230) mm3与(288±145) mm3,P＜0.01].结论 CSC是人前列腺癌中EMT现象发生的主要细胞载体.
