摘要：
目的 观察人脐带间充质干细胞来源的外泌体转运微小RNA(miRNA,miR)-145-5p对胰腺癌细胞增殖、侵袭、细胞周期及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 本实验分组为空白对照组、单独外泌体组、miR-145-5p模拟物组以及miR-145-5p阴性对照组.将人脐带间充质干细胞来源的外泌体(hucMSCs-exo)分别转染miR-145-5p模拟物组(miR-145-5p mimic)及miR-145-5p阴性对照组(miR-145-5p negative control)后加入到胰腺癌细胞中,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法和Transwell实验观察BxPC3和人胰腺癌细胞(PANC)-1细胞增殖和侵袭能力的变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测BxPC3和PANC-1细胞中Smad3蛋白表达的变化.结果 采用超速离心法从人脐带间充质干细胞(hucMSCs)条件培养基中分离外泌体.透射电镜下可见典型的双凹圆盘状结构;Nanosight结果显示外泌体直径范围在52.5～85.5 nm,平均直径119 nm,1 ml条件培养基中约含有400个;Western blot检测到CD9和CD81标志蛋白的阳性表达.CCK-8细胞增殖实验结果显示4d后145-exo组BxPC3和PANC-1细胞吸光度值显著低于NC-exo组[(2.681 ±0.049)比(3.683±0.003),t =20.460,P＜0.05;(2.646±0.116)比(3.450±0.112),t=4.992,P＜0.05],差异有统计学意义;Transwell细胞侵袭实验结果显示145-exo组BxPC3和PANC-1侵袭转移细胞数明显少于NC-exo组[(68.200±3.262)个比(104.800±2.177)个,t=9.333,P＜0.05;(83.000±3.493)个比(146.200±4.432)个,￡=11.200,P＜0.05],差异有统计学意义;细胞周期结果显示145-exo组Go/G1比例高于NC-exo组[(43.030±1.060)％比(31.730±0.843)％,t =8.346,P＜0.05],差异有统计学意义;细胞凋亡结果显示145-exo组的早凋亡率和晚凋亡率均高于NC-exo组[(10.970±0.405)％比(6.863±0.099)％,t=9.830,P＜ 0.05;(2.400±0.166)％比(1.513±0.045)％,t=5.167,P＜0.05],差异有统计学意义;Western blot结果显示Smad3蛋白在BxPC3和PANC-1的145-exo组的表达分别下调了38.0％和37.4％(t=6.362,P＜0.05;t=11.430,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 HucMSCs-exo可通过转运miR-145-5p抑制胰腺癌细胞的生长,其机制与Smad3蛋白表达下调有关.
