摘要:
目的 评价胶原膜上通过抗体结合腺病毒或质粒DNA作为基因投递载体的可行性及效果.方法 采用交联剂N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)将抗腺病毒或抗DNA抗体共价键结合在胶原膜上,通过这些抗体将腺病毒载体(Ad-GFP)和质粒DNA(pEGFP-C1)结合在膜上.采用同位素标记的质粒DNA(pDNA)在体外测定基因的释放,用细胞转染试验评价这种新型基因递送体系的功能.结果 通过SPDP交联剂成功地将抗体共价键连接在胶原膜上,并结合了表达绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒和质粒DNA.细胞实验发现胶原膜上有大量表达GFP的阳性细胞,而膜以外的区域则没有GFP阳性细胞,表明具有局部递送特征.偶联Ad-GFP的胶原膜最大转染效率达到92.8%,而且在107~1010病毒粒子/mL范围内,转染效率呈正剂量相关性.偶联pEGFP-C1的胶原膜诱导的细胞转染效率约为21.8%,结合32P标记的pDNA的胶原膜体外基因释放持续13天以上.用胶原涂层的不锈钢血管支架进行了同样的试验,在细胞培养中支架表面有大量GFP阳性细胞,其他区域没有GFP阳性细胞.结论 胶原膜携带抗体偶联基因是一种新型的基因投递体系,可实现高效和局部定位的基因转染.