摘要：
目的 研究血管外膜脂肪组织分泌的脂联素对血管内膜损伤后内皮细胞增生的影响及可能的分子机制.方法 将C57BL/6J野生型小鼠72只完全随机分为A组(仅剪开颈部皮肤后再缝合)、B组(给予颈动脉套管结扎)、C组(剪开颈部皮肤后于颈动脉周围移植脂联素基因敲除小鼠脂肪组织)及D组(颈动脉套管结扎同时于颈动脉周围移植脂联素基因敲除小鼠脂肪组织),每组18只.手术8周后处死小鼠,取各组小鼠左颈总动脉切片,采用苏木精-伊红染色,观察各组小鼠颈动脉内膜增生情况并测定内膜增厚程度,以内膜面积与中膜面积的比值表示.应用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠颈动脉组织内脂联素水平.采用蛋白质印迹法检测各组小鼠颈动脉组织内磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)及其磷酸化产物的水平.体外实验将小鼠内皮细胞以5×104个/ml接种于内皮细胞生长培养基中,将细胞分为对照组、脂联素组(在对照组基础上加入重组脂联素100 mg/L)及PI3K抑制组(在对照组基础上加入重组脂联素100 mg/L和PI3K抑制剂LY29400 250 μg/L),利用标记5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)的微小RNA(miR-21)模拟物转染小鼠内皮细胞,使其在细胞中呈过表达状态,通过荧光显微镜观察各组内皮细胞的增生情况,比较BrdU阳性细胞百分率.结果 B组小鼠颈动脉内膜增厚程度明显大于A组、C组和D组,差异均有统计学意义[(1.37±0.09)比(0.82±0.18)、(0.71±0.05)、(1.03±0.06),P值分别为0.023、0.001、0.010].B组小鼠脂联素的表达水平明显高于A组、C组和D组,差异有统计学意义[(95±6) ng/L比(77±5)ng/L、(55±5)ng/L、(70±7)ng/L,P=0.049、0.021、0.027].C组与D组小鼠颈动脉组织内AKT及PI3K磷酸化产物水平较A组与B组降低.体外实验脂联素组内皮细胞的BrdU阳性细胞率较对照组明显增加,差异有统计学意义[(30.0±1.7)％比(10.5±1.4)％,P＜0.01];PI3K抑制组内皮细胞的BrdU阳性细胞率较脂联素组明显降低,差异具有统计学意义[(13.9±1.8)％比(30.0±1.7)％,P＜0.01].结论 血管外膜脂肪组织源性脂联素可能通过PI3K/AKT信号通路在血管内膜损伤后促进内皮细胞增生.
