摘要:
目的:利用高内涵筛选(high-content screening,HCS)、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、激光扫描细胞分析术(laser scanning cytometry,LSC)等细胞组学技术对心肌细胞凋亡特征进行研究.方法:缺氧缓冲液处理H9C2心肌细胞,建立体外心肌细胞凋亡模型,以常规DMEM培养为对照组,处理6h后收取细胞行Annexin V-FITC、PI染色,分别利用HCS和FCM检测,分析心肌细胞早、晚期凋亡以及坏死的比例.利用小鼠心脏左前降支结扎,建立心肌梗死在体模型,术后28d收取心脏,进行TUNEL染色,利用HCS和LSC分析心脏组织健存区、交界区和梗死区心肌细胞的凋亡.结果:缺氧缓冲液处理H9C2心肌细胞6h后,HCS和FCM方法均显示早期凋亡细胞缺氧组与DMEM组,差异有统计学意义,分别为[(17.69±2.85)vs.(5.31±0.86)%,P<0.01]和[(12.18±0.61)vs.(3.08±0.15)%,P<0.01],晚期凋亡与坏死细胞比例变化不明显,表明缺氧缓冲液处理6h主要诱导心肌细胞早期凋亡.小鼠心肌梗死28d后,HCS和LSC方法均显示心脏梗死区和交界区有凋亡细胞,梗死区更明显,整体凋亡率分别为6.08%和4.35%,健存区无细胞凋亡.结论:HCS和FCM方法能够可靠、稳定和量化评价心肌细胞凋亡,准确区分细胞早、晚期凋亡和坏死,两种方法结果一致;HCS和LSC方法还可分析组织水平的细胞凋亡;而LSC优势在于可明确凋亡细胞的组织定位.