摘要：
比较自身不表达核相关受体因子（nuclear receptor related factor1,Nurr1）基因的人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH和过表达外源性nurr1基因的SK-N-SH/Nurr1细胞对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的损伤反应,探讨nurr1基因在6-OHDA致细胞损害（死亡或凋亡）中的作用.方法用免疫细胞化学方法和RT-PCR检测基因转染细胞SK-N-SH/NURR1的nurr1蛋白及NURR1 mRNA的表达.细胞经不同浓度6-OHDA(50 ～100 μmol/L)作用不同时间(6、12 h),经AnnexinV/PI双染后流式细胞术( flow cytometry,FCM)测定早期细胞凋亡比例.细胞经75 μmol/L 6-OHDA作用12 h,通过透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)观察细胞超微结构变化.用Western blotting方法检测75 μmol/L 6-OHDA作用6、12h,细胞凋亡因子Caspase-3活性前体蛋白的表达水平.结果免疫细胞化学染色结果显示,基因转染细胞SK-N-SH/Nurr1表达NURR1蛋白；经RT-PCR检测,基因转染细胞表达NURR1 mRNA,说明外源性nurr1基因在转染细胞内过表达.FCM检测结果显示,75 μmol/L 6-OHDA作用12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P =0.000),而100 μmol/L 6-OHDA作用6、12 h后,2株细胞均表现为毒性损伤.TEM显示,75 μmol/L 6-OHDA作用12 h后,部分SK-N-SH/Nurr1细胞出现了典型凋亡改变,而SK-N-SH细胞主要表现为毒性损伤.4.75 μmol/L 6-OHDA作用6、12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞Caspase-3活性前体蛋白表达显著下降(P =0.000),而SK-N-SH细胞Caspase-3活性前体蛋白表达变化不明显.结论外源性nurr1基因过表达促进6-OHDA诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,在低剂量(≤75 μmol/L)时,凋亡比例与剂量呈正相关,高剂量时6-OHDA主要诱导细胞毒性损伤.
