摘要：
目的:构建表达人早老素1 N端部分肽段的基因重组质粒.方法:实验于2004-12/2005-01在北京老年医学研究所神经生物研究室完成.参照人早老素1 mRNA结构设计合成含适当酶切位点的聚合酶链反应引物,从质粒pBS-Presenilinsl扩增其5'端390bp的cDNA片段,插入质粒pGEX-4T-1,转化入大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,使其在大肠杆菌中表达以谷胱甘肽S转移酶为标签的融合蛋白质.用凝血酶定点分解融合蛋白,并应用亲和层析法纯化早老素1 N130肽.结果:聚合酶链反应扩增产物约400 bp,核酸序列分析结果显示,扩增产物为393 bp编码130个氨基酸.重组质粒在原核细胞中表达受异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导呈时间依赖性递增.纯化的目的蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳上表现为单一条带,其表观相对分子质量为13 000.每升菌液可收获目的蛋白4.5 mg.结论:构建人早老素1 N端部分肽段的基因重组质粒,制备了基因重组型早老素1N130肽,并确认其亲水特征.
