目的 探讨乳腺癌间质成纤维细胞(BCSFs)分离、培养及鉴定的方法,为其功能的研究奠定基础.方法 在无菌条件下,术中留取乳腺癌切除标本的部分癌组织块,剪切成1 mm×1 mm×1 mm大小块后采用振荡联合Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶消化法分离、培养癌组织间质成纤维细胞.通过观察细胞形态、免疫组织化学检测(CK、Vimentin、α-SMA以及TE-7)和流式细胞仪测定以鉴定其是否为间质成纤维细胞.结果 培养24 h后有细胞贴壁生长,7～10 d左右细胞近融合,可传代培养.经鉴定,BCSFs分离、培养的成功率为90％(18/20),其细胞特点为:细胞呈扁平梭形,两端有细胞质突起,有一个扁平卵圆形囊状的核,胞浆丰富;免疫组织化学检测显示CK(-)、Vimentin(+)、α-SMA(+)、TE-7(+);流式细胞仪检测CD34和CD45均为(+).结论 振荡结合双酶消化法可有效地分离、培养BCSFs.本方法为进一步研究BCSFs提供了一种新的细胞来源途径.