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文章类型：
机构：
[1]首都医科大学宣武医院血管外科, 北京100053
血管外科
首都医科大学宣武医院
出处：
ISSN：
关键词：
人内皮型一氧化氮合酶基因
绿色荧光蛋白
真核表达质粒
基因重组
摘要：
目的:构建pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒.方法:应用基因重组手段,根据人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)基因序列和表达载体pEGFP-N1质粒上的多克隆位点设计了1对引物,对含有heNOS基因的质粒pBluescript Ⅱ SK-heNOS进行了PCR扩增,得到了约3.6 kbp的目的片段.将其插入到载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)报告基因融合,重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序进行鉴定.结果:用PCR方法成功从质粒pBluescript Ⅱ SK-heNOS中扩增出heNOS基因片段,经菌液PCR、酶切及测序鉴定,heNOS基因成功插入到载体pEGFP-N1质粒中,插入目的基因的真核表达载体的酶切图谱与预期一致,并且heNOS基因与Genbank所提供的序列完全一致.结论:成功构建了pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒.
基金：
国家自然科学基金资助项目(30471708)； 北京市自然科学基金资助项目(7072031)；
第一作者：
第一作者机构：
[1]首都医科大学宣武医院血管外科, 北京100053
通讯作者：
通讯机构：
[1]首都医科大学宣武医院血管外科, 北京100053
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王国栋,郭连瑞,谷涌泉,等.pEGFP-N1-heNOS重组质粒的构建与鉴定[J].南京医科大学学报（自然科学版）.2007,27(7):651-655.
