摘要：
为了构建人野生型和突变型PS1(早老素-1,presenilin-1)-EGPF共表达蛋白的真核表达重组质粒pcDNA3.1/PS1-EGFP,本研究应用下述方法:对野生型pcDNA3.1/PS1(WT)质粒,采用一步法定点突变技术构建pcDNA3.1/PS1(C407G)突变质粒;合成两对引物,利用PCR技术从pEGFP-C1质粒合成EGFP cDNA片断,在EGFP转录起始密码子ATG之前导入一BamHⅠ酶切位点,利用与pcDNA3.1/PS1质粒共存的另一EcoRⅠ酶切位点,将合成的EGFP片断通过BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ两个位点分别克隆入野生型及突变型pcDNA3.1/PS1质粒的多克隆位点中,从而构建了野生型和突变型PS1与增强绿色荧光蛋白共表达载体.经限制性内切酶双酶切鉴定及DNA测序证实此蛋白共表达载体构建成功.利用此重组质粒瞬时转染SH-SY5Y细胞,72 h后荧光显微镜(激发波长488 nm)观察细胞内有绿色荧光蛋白表达.本研究成功构建了人野生型和突变型PS1-EGFP的真核表达载体,为下一步建立细胞模型,研究突变型PS1的生物学功能以及PS1在AD发病机制中的作用奠定了基础.
