摘要：
目的 采用常规PCR、巢式PCR(Nest PCR,nPCR)和定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)检测耶氏肺孢子菌(Pneumoc ystisjirovecii,Pj)特异性核酸片段,调查脑瘤手术患者咽喉部吸取液中的Pj. 方法 选取无肺炎脑瘤手术患者108例,留取手术咽喉部吸取液,分别以线粒体大亚基rRNA(Mitochondrial large subunit rRNA,mtLSUrRNA)为靶基因的常规PCR(Mt-PCR)和巢氏PCR(Mt-nPCR),以及主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)为靶基因的常规PCR(Msg-PCR),检查咽喉部吸取液中Pj特异性核酸片段,阳性标本进行qPCR,检测分别以mtLSUrRNA和Msg为靶基因的拷贝数. 结果 108例脑瘤手术患者咽部吸取液Mt-nPCR、Msg-PCR及MtPCR扩增阳性率率分别为41.7％(45/108)、15.7％ (17/108)和4.6％(5/108),其中3种检测方法同为阳性1例(占0.9％),任意2种方法阳性11例(占10.2％),Mt-nPCR和Msg-PCR任意1种方法阳性42例(占38.9％),3种方法均阴性54例(占50.0％).54例PCR检测阳性的标本同时进行mtLSUrRNA定量PCR(Mt-qPCR)和Msg定量PCR (Msa-qPCR)检测,其中Mt-qPCR检测为100～999拷贝/μl2例(占3.7％),1 000～9 999拷贝/μl有49例(占90.7％),≥10 4拷贝/μl有3例(占5.6％);Msg-qPCR检测为1 000～9 999拷贝/μl 14例(占25.9％),10 000～99 999拷贝/μl 21例(占38.9％),100 000～999 999拷贝/μl 14例(占25.9％),≥106拷贝/μl有5例(占9.3％).54例中Msg-qPCR拷贝数＞Mt-qPCR拷贝数51例(占94.4％),Msg-qPCR拷贝数＜Mt-qPCR拷贝数3例(占5.6％). 结论 核酸扩增法检测脑瘤手术患者咽喉部吸取液Pj阳性率为50.0％,其中MtqPCR检测多数为103拷贝/μl,Msg qPCR检测多数为103～105拷贝/μl,解读需谨慎.
