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机构：
[1]首都医科大学附属北京天坛医院消化内科北京100050
诊疗科室
消化内科
首都医科大学
首都医科大学附属北京天坛医院
首都医科大学附属天坛医院
[2]首都医科大学附属北京朝阳医院血管外科北京100050
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[3]首都医科大学附属北京友谊医院消化内科北京100050
首都医科大学
首都医科大学附属北京友谊医院
出处：
ISSN：
关键词：
PHD锌指蛋白8
慢病毒
食管鳞癌细胞
细胞增生
摘要：
目的 制备锌指蛋白8(plant homeodomain finger protein 8,PHF8)RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒(lentivirus)颗粒,建立PHF8表达沉默的人食管鳞癌(esophageal squamous-cell carcinoma,ESCC)稳定细胞系并观察PHF8对细胞增生的影响.方法将目的 基因或阴性对照短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体与包装载体共转染病毒包装细胞293T,收集并浓缩上清液获得重组慢病毒;测定病毒滴度后用于感染食管鳞癌细胞;通过荧光显微镜及流式细胞仪观察感染效率,嘌呤霉素筛选法建立稳定细胞系;定量PCR及Western Blotting检测PHF8的表达沉默;MTS法检测细胞的增生特性.结果成功制备了沉默PHF8的重组慢病毒;应用重组病毒感染食管鳞癌细胞后,PHF8 mRNA 和蛋白的表达水平显著降低,细胞的增生明显下降.结论慢病毒介导的shRNA干扰能有效抑制食管鳞癌细胞的PHF8表达及细胞增生.
基金：
国家自然科学基金(81302160)(81272447)北京市自然科学基金(7122055)
第一作者：
第一作者机构：
[1]首都医科大学附属北京天坛医院消化内科北京100050
推荐引用方式(GB/T 7714)：
孙秀静,原标,朱圣韬,等.沉默PHF8重组慢病毒的制备及其对食管鳞癌细胞增生的影响[J].首都医科大学学报.2014,35(1):122-128.
