摘要：
目的:建立呼吸道合胞病毒快速、敏感、特异、廉价的早期血清学检测方法.方法:从北京儿童医院患者鼻咽分泌物分离的呼吸道合胞病毒中,用RT-PCR的方法扩增出RSV F蛋白的F1区部分基因片段F1-1(AA137～363),此区域包含F蛋白的主要中和抗原位点.将该基因片段克隆到pMD18-T载体,将连接质粒经PCR鉴定,证实插入目的片段.酶切后将该片段与pET-32a表达质粒连接,用限制性内切酶酶切及序列测定,证实插入片段的正确性.利用pET-32a表达质粒在大肠杆菌BL21表达正确的RSV F1-1蛋白.重组蛋白N端包含有6个连续的组氨酸标签,通过镍离子金属鏊合亲和层析纯化,获得了高纯度的目的重组蛋白RSV F1-1,然后将重组RSV F1-1包被建立间接ELISA法检测人血清中的RSVF蛋白IgG抗体.结果:RT-PCR产物的片段大小为678 bp.经酶切和测序鉴定后,插入序列无误.Western Blot分析显示:重组蛋白具有较好的抗原性.用该蛋白建立的间接ELISA方法检测结果与进口Euroimmun和维润试剂盒检测结果比较,差异无显著性.结论:F蛋白基因片段的成功表达为进一步开发诊断试剂盒提供了实验依据.
